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消除组织培养污染的方法步骤

日期:2018/2/26 17:48:32 点击次数 2077 发布单位:天义生物谷  录入:李清

    摘要:高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。

    当重要的组织培养物质污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。

    下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。

    ①在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。

    ②分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。例如,两性霉素B推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。

    ③每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。

    ④确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2-3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2-3代。

    ⑤在无抗生素的培养基中培养细胞一代。

    ⑥重复步骤4。

    ⑦在无抗生素的培养基中培养4-6代,确定污染是否以已被消除。

 
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